神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基的自然篩選法

　　神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基自然篩選法是迄今應(yīng)用，也是zui簡單和容易操作且行之有效的方法。其原理是利用特殊的培養(yǎng)基使成熟的神經(jīng)細(xì)胞無法較長時間地成活，而分離篩選出能夠在該培養(yǎng)條件下存活并增殖的神經(jīng)干細(xì)胞群體。首先將含神經(jīng)干細(xì)胞的神經(jīng)組織通過機械或酶解分散等方法制備成單細(xì)胞，然后培養(yǎng)于含有特殊營養(yǎng)添加劑和促增殖因子的不含血清的培養(yǎng)液中。非神經(jīng)干細(xì)胞在這種培養(yǎng)系統(tǒng)中由于營養(yǎng)缺陷無法較長時間地存活，而神經(jīng)干細(xì)胞則適應(yīng)該培養(yǎng)體系并在促增殖因子作用下生長增殖。因此，經(jīng)過培養(yǎng)一段時間之后，就可獲得通過這種自然篩選而增殖形成的呈神經(jīng)球狀生長的神經(jīng)干細(xì)胞群體。這種利用特殊培養(yǎng)基自然篩選神經(jīng)干細(xì)胞方法的優(yōu)點是：簡便易行，不需要特殊的儀器設(shè)備等條件，分離效率高，神經(jīng)干細(xì)胞損傷小易于成活。

　　神經(jīng)干細(xì)胞體外培養(yǎng)另外很重要的一點就是如何盡量讓其少分化或不分化，除了神經(jīng)干細(xì)胞本身的特性決定了一部分不對稱分裂的細(xì)胞必將發(fā)生自主分化外，培養(yǎng)條件對神經(jīng)干細(xì)胞的分化與否影響很大，比如在培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)，將神經(jīng)干細(xì)胞球培養(yǎng)于塑料器皿，其黏附于器皿表面并發(fā)生分化的可能要比培養(yǎng)于玻璃器皿的高很多。另外，某些底物如多聚賴氨酸或多聚尿氨酸、作為細(xì)胞外基質(zhì)的的層黏臉蛋白、膠原等都能在無特殊誘導(dǎo)劑存在的情況下，促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞的貼壁而分化。神經(jīng)干細(xì)胞在體外分化的形態(tài)表現(xiàn)為由圓形變成帶有明顯突起、形態(tài)各異的神經(jīng)細(xì)胞，懸浮的神經(jīng)球出現(xiàn)貼壁呈圓盤狀，形態(tài)各異的細(xì)胞向周圍呈放射狀長出并遷移，甚至全部細(xì)胞均分化平鋪于器皿上生長。