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心肌分化試劑盒的復蘇和維持

更新時間:2016-02-26瀏覽:1951次

   之前的文章中介紹過心肌分化試劑盒的凍存方法,本文再給大家說說心肌分化試劑盒的復蘇和維持。

  心肌分化試劑盒的復蘇方法:

  1. 37℃水浴預熱心肌接種培養(yǎng)基,取出包被過Matrix的培養(yǎng)皿/瓶,吸去包被液并加入適量心肌接種培養(yǎng)基,置于5% CO2的37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中。

  2. 37℃解凍細胞,快速搖晃使細胞融化至僅剩一小塊冰晶(避免凍存管蓋接觸水面),迅速取出并用70%酒精消毒凍存管外表面。

  3. 用1ml移液器小心的將細胞懸液轉移至一個新的50ml離心管,避免劇烈吹吸。

  4. 用1ml 心肌接種培養(yǎng)基潤洗凍存管,以收集剩余細胞。然后逐滴加入含有細胞懸液的50ml離心管,由于zui初滴加的稀釋比例較大,應維持在5秒1滴(50uL)的較慢速率,2分鐘左右滴加完此1ml培養(yǎng)基,滴加過程中不斷輕搖混勻。

  5. 以每秒1滴的速率,逐滴加入4ml 心肌接種培養(yǎng)基,滴加過程中不斷輕搖混勻。200g離心5分鐘。

  6. 用心肌接種培養(yǎng)基重懸細胞,輕柔吹打混勻,并接種到準備好的培養(yǎng)皿/瓶中,水平十字振動使細胞均勻分布。

  7. 5% CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時,更換為心肌維持培養(yǎng)基,維持培養(yǎng)。

  心肌分化試劑盒的維持:

  1. 37℃水浴預熱心肌維持培養(yǎng)基。

  2. 獲得的心肌細胞用心肌維持培養(yǎng)基培養(yǎng),每48小時換液一次;或者加入標準量150%的維持培養(yǎng)基,每72小時換液一次。

  3. 細胞在4周內性狀穩(wěn)定。如果需要長期培養(yǎng),為了維持細胞穩(wěn)定性和純度,需要定期采用心肌純化*培養(yǎng)基進行處理,一般每4-6周處理一次,每次持續(xù)3-4天。

 

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