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淋巴細(xì)胞分離液

更新時(shí)間:2015-12-24瀏覽:2967次

分離目的  
方便在人體外對(duì)機(jī)體各種免疫細(xì)胞分別作鑒定,計(jì)數(shù)或功能測(cè)定。  淋巴細(xì)胞分離以后可以做淋巴細(xì)胞抗原片制備,E花環(huán)試驗(yàn),淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn),淋巴細(xì)胞培養(yǎng)(需無(wú)菌操作)    【分離原理】    人 淋巴細(xì)胞的方便來(lái)源是外周血,分離的原則是收率較高,純度較好,失活較低,根據(jù)不同試驗(yàn)有相對(duì)純度,無(wú)論采用哪種方法,應(yīng)盡zui大可能保持細(xì)胞應(yīng)有活性。分 離的技術(shù)可根據(jù)細(xì)胞的物理性狀和表面標(biāo)志設(shè)計(jì),根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)?zāi)康目刹捎妹芏忍荻入x心法、吸附分離法和其它特殊分離法。此次實(shí)驗(yàn)采用的1就是密度梯度離心法。其原理是:人外周血中各種細(xì)胞的密度不同,人紅細(xì)胞密度為1.093,粒細(xì)胞為1.092,淋巴細(xì)胞為1.074±0.001。密度梯度離心法的原理主要根據(jù)各類(lèi)血細(xì)胞比重的差異,利用比重介于某兩類(lèi)細(xì)胞之間的細(xì)胞分離液對(duì)血液離心,使一定比重的血細(xì)胞依相應(yīng)的密度梯度分布于不同的獨(dú)立帶,從而達(dá)到分離的目的。      
材料
1、肝素抗凝管,普通管(負(fù)壓),采血針,血清收集管 2、淋巴細(xì)胞分離液(比重1.077 – 1.080 g/mL)。 3、無(wú)Ca++、Mg++、Hank's 液  4、刻度吸管、毛細(xì)吸管、離心管、離心機(jī)等。  5置于冰箱的冷丙酮(固定細(xì)胞,保持細(xì)胞的完整性)   
方法
1.采靜脈血2ml加入肝素抗凝管(或枸櫞酸鈉),3ml加入普通管。  2.普通管斜面放置30MIN,此時(shí)可分離淋巴細(xì)胞。用竹簽將血塊輕輕剝離管壁(主張用玻璃棒),2000rPm離心20分鐘,用毛細(xì)吸管吸取上清(血清)于血清收集管中,于4℃冰箱保存?zhèn)溆?,用于以后的ELISA實(shí)驗(yàn),對(duì)流免疫電泳實(shí)驗(yàn)和傷寒試管凝集實(shí)驗(yàn),溶血反應(yīng),免疫比濁測(cè)定補(bǔ)體C3或C4等等。(剝離時(shí)也可用毛細(xì)吸管輕輕剝離) 

 

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