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TAE與TBE有何區(qū)別,怎么選擇?

更新時間:2022-02-28瀏覽:4466次

相關(guān)原理:

  緩沖液在電泳過程中的一個作用是維持合適的pH。電泳時正極與負極都會發(fā)生電解反應,正極發(fā)生的是氧化反應(4OH--4e->2H2O+O2),負極發(fā)生的是還原反應(4H++4e->2H2),長時間的電泳將使正極變酸,負極變堿。一個好的緩沖系統(tǒng)應有較強的緩沖能力,是溶液兩極的pH保持基本不變。 

      電泳緩沖液的另一個作用是使溶液具有一定的導電性,以利于DNA分子的遷移,例如,一般電泳緩沖液中應含有0.01-0.04mol/L的Na+離子,Na+離子的濃度太低時電泳速度變慢;太高時就會造成過大的電流使膠發(fā)熱甚至熔化。 

      電泳緩沖液還有一個組分是EDTA,加入濃度為1-2mmol/L,目的是螯合Mg2+ 等離子,防止電泳時激活 DNA酶,此外還可防止Mg2+離子與核酸生成沉淀。

 

TAE&TBE 

     TAE是使用廣泛的緩沖系統(tǒng)。其特點是超螺旋在其中電泳時更符合實際相對分子質(zhì)量(TBE中電泳時測出的相對分子質(zhì)量會大于實際分子質(zhì)量),且雙鏈線狀DNA在其中的遷移率較其他兩種緩沖液快約10%,電泳大于13kb的片段時用TAE緩沖液將取得更好的分離效果,此外,回收核酸片段時也易用TAE緩沖系統(tǒng)進行電泳。TAE的缺點是緩沖容量小,長時間電泳(如過夜)不可選用,除非有循環(huán)裝置使兩極的緩沖液得到交換。 

      TBE的特點是緩沖能力強,長時間電泳時可選用TBE,并且當用于電泳小于1kb的片段時分離效果更好。TBE用于瓊脂糖凝膠時易造成高電滲作用,并且因與瓊脂糖相互作用生成非共價結(jié)合的四羥基硼酸鹽復合物而使核酸片段的回收率降低,所以不宜在回收電泳中使用。 


怎么選擇:

對于分辨率要求不高時,使用TAE和TBE均可;對于分辨率要求比較高時,較低濃度的膠有利于提高大分子量核酸的分辨率,此時宜使用TAE;而較高濃度的膠有利于提高小分子量核酸的分辨率,此時宜使用TBE。

 

 

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