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動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要的一些特殊條件

更新時(shí)間:2022-02-16瀏覽:4089次

①加胎牛血清培養(yǎng)基:  
動(dòng)物細(xì)胞離體培養(yǎng)常常需要血清。各種細(xì)胞合成培養(yǎng)基(如MEM、RPMll640、DMEM)只提供細(xì)胞生長(zhǎng)所需的各種基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),包括碳水化合物、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素等。血清提供生長(zhǎng)必需因子,如激素、微量元素、礦物質(zhì)和脂肪。根據(jù)不同細(xì)胞的需求,一般含有10%~20%的血清培養(yǎng)基即可維持細(xì)胞較快的生長(zhǎng)增殖速度。  
②無(wú)菌環(huán)境:  
無(wú)毒和無(wú)菌是體外培養(yǎng)細(xì)胞的首要條件。使用的各種試劑和耗材要經(jīng)過(guò)高壓或紫外線滅菌。嚴(yán)格的無(wú)菌操作是養(yǎng)好細(xì)胞的必要前提。為防止細(xì)胞受到微生物感染,可在培養(yǎng)基中加入雙抗。  
③溫度和氣體環(huán)境:  
一般動(dòng)物細(xì)胞在體外培養(yǎng)的適宜溫度是37℃,不適宜的環(huán)境溫度會(huì)影響細(xì)胞的生長(zhǎng)甚至死亡。二氧化碳和氧氣的比例要在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中不斷進(jìn)行調(diào)節(jié),一般維持在5%。二氧化碳既是細(xì)胞的代謝產(chǎn)物,又與維持培養(yǎng)液的pH密切相關(guān)。  
如何防控污染:保持良好的操作習(xí)慣,超凈臺(tái)要紫外滅菌30min,以70%的乙醇擦拭無(wú)菌操作臺(tái),開啟超凈臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)數(shù)分鐘后,才開始實(shí)驗(yàn)。  
每次只處理一種細(xì)胞,以免失誤混淆或細(xì)胞間污染,操作不要觸碰吸管尖頭部或容器口等。  
像對(duì)待孩子一樣養(yǎng)細(xì)胞,它很脆弱,最好每天關(guān)注一下,以免出現(xiàn)培養(yǎng)箱缺二氧化碳,停電、溫度不夠等現(xiàn)象。  
避免全軍覆沒(méi),好細(xì)胞要及時(shí)保存,有備用的細(xì)胞,這樣即使有細(xì)胞污染還可以有備用的細(xì)胞頂上,不至于太惱火,好習(xí)慣要保持。  
不同細(xì)胞喜好不同,需要在培養(yǎng)中慢慢體會(huì),例如平滑肌細(xì)胞比較好長(zhǎng),2-3天可能就會(huì)有很多細(xì)胞,應(yīng)該算是比較好養(yǎng)活的;內(nèi)皮細(xì)胞分泌物較多,需要時(shí)不時(shí)換洗才會(huì)長(zhǎng)的好等等。

 

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