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如何使用細胞培養(yǎng)培養(yǎng)板?看完本篇你就明白了

更新時間:2021-07-16瀏覽:2631次

   今天讓我們一起來了解一下該如何操作細胞培養(yǎng)培養(yǎng)板,希望還不知道如何使用的用戶可不要錯過了。

  細胞培養(yǎng)培養(yǎng)板的操作步驟如下:

  1.加樣品:將標本稀釋液100ul(或2滴)加到包被板內(nèi)(預(yù)留陰陽性及空白對照2-5孔),將待檢血清用PBS或生理鹽水按1:20稀釋后取10ul加入反應(yīng)孔內(nèi)。

  2.加對照:加入陰性對照1-3孔,陽性對照1孔,各100ul對照血清??瞻讓φ?孔空置。

  3.溫育:將反應(yīng)板震蕩使樣品混勻后,置37℃溫箱或水浴反應(yīng)20分鐘。

  4.洗板:用蒸餾水將濃縮洗滌液15ml稀釋至300ml。(1)手洗:將反應(yīng)板孔內(nèi)容物傾出,將洗滌液注滿反應(yīng)孔,放置30秒鐘后用力甩去,如此重復(fù)5次后拍干。(2)機洗:5次,每孔注入洗滌液200ul或注滿,停留30秒鐘后吸盡拍干。

  5.加酶標工作液:每孔加入100ul(或2滴)酶標工作液,置37℃溫箱反應(yīng)20分鐘后,洗板5次,洗板操作同步驟4。

  6.顯色和終止反應(yīng):將底物A、B液各50ul(或1滴)加到反應(yīng)孔內(nèi),37℃避光顯色10分鐘。每孔加入終止液50ul(或1滴)混勻終止反應(yīng)。

  結(jié)果判定

  1.酶標儀設(shè)定波長450nm,先用空白調(diào)零,然后測定各孔OD值;如果選用雙波長測定,不必設(shè)置空白對照孔。

  2.當(dāng)陰性對照平均OD值小于0.08,陽性對照(pc)OD值大于0.30時,說明試劑盒有效且實驗操作正確,否則應(yīng)當(dāng)重復(fù)試驗。

  3.臨界值(CUT—OFF VALUE)=0.15+陰性對照平均(NC)OD值(當(dāng)陰性平均OD值小于0.05時,按0.05計算;當(dāng)陰性平均OD值大于或等于等于0.05時按實際值計算)。

  4.標本OD值≤臨界值為陰性,標本OD值>臨界值為陽性。

  常用不同培養(yǎng)板的孔底面積及推薦加液量:不同孔板所加培養(yǎng)液的液面都不宜太深,一般在2-3mm范圍,結(jié)合不同孔的底面積就可算出各培養(yǎng)孔的適宜加液量。若加液量過多會影響氣體(氧氣)交換,而且在搬動過程中易溢出造成污染。具體所加細胞密度依實驗的目的不同靈活掌握。

 

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