亚洲欧洲精品一区二区三区不卡_人人澡人人妻人人爽_久久久久久久久91_少妇久久久久久久久久

歡迎光臨紅榮微再(上海)生物工程技術有限公司!
服務熱線15021010459
Article技術文章
首頁 > 技術文章 > 關于細胞凍存你了解嗎?

關于細胞凍存你了解嗎?

更新時間:2021-04-09瀏覽:4129次

實驗簡介:
    細胞培養(yǎng)技術創(chuàng)建于1907年,歷經一個世紀磨練與升華,現已成為自然科學領域*的研究方法之一。小伙伴們要想在如今細胞培養(yǎng)技術廣泛滲透的科學研究領域搞好科研,最基礎的細胞株的冷凍保存和解凍復蘇技術自然不能忽視。
    細胞凍存是將細胞放在低溫環(huán)境,減少細胞代謝,以便長期儲存的一種技術。細胞凍存是細胞保存的主要方法之一,起到了細胞保種的作用。

實驗前準備: 
1.材料準備:

     生長良好之培養(yǎng)細胞、新鮮培養(yǎng)基、DMSO、無菌塑料冷凍保存管(Nalgene 5000-0020)、等速降溫機

2.冷凍方法理論準備:

   (1)傳統(tǒng)方法:冷存管置于4℃10分鐘--->-20℃30分鐘--->-8O℃16~18小時(或隔夜)--->液氮槽長期儲存。-20℃不可超過1小時,以防止胞內冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-8O℃冰箱中。
     (2)程序降溫:利用已設定程序的等速降溫機以-1~-3℃/分鐘之速度由室溫降至(-8o℃以下) -120℃,再放在液氮槽長期儲存。適用于懸浮型細胞與hybridoma之保存。

實驗步驟:

細胞凍存步驟:

  1.用移液器吸走原培養(yǎng)基,加入適量PBS洗1-2遍;
  2.加入適量胰酶,置于培養(yǎng)箱中消化;
  3.待消化到位后加入適量血清或*培養(yǎng)基終止消化,800-1000rpm離心3-5min;
  4.配制凍存液,待細胞離心后去上清,加入凍存液重懸,調整細胞濃度為3×106~1×107 cells/mL,轉移到凍存管中;
  5.將凍存管放入程序降溫盒中,-80度過夜,然后轉移到液氮中保存。
  6.凍存細胞后應取出一管復蘇,檢測細胞的存活率。理論上細胞可在液氮內長期保存,
為穩(wěn)妥起見可在細胞凍存半年后復蘇培養(yǎng),觀察細胞生長情況,再繼續(xù)凍存

注意事項
  1.欲冷凍保存之細胞應在生長良好且存活率高之狀態(tài),約為80~90%致密度。
冷凍前檢測細胞是否仍保有其*性質,例如hybridoma應在冷凍保存前一至二日測試是否有抗體之產生。

   2.細胞在液氮中可長期凍存無*,而不會影響細胞活力﹔在-70度可保存數月。注意冷凍保護劑之品質。
DMSO應為試劑級等級,無菌且無色是直接購買無菌產品,以5~10m1小體積分裝,4℃避光保存,勿作多次解凍。

   3.凍存細胞數量要足夠。無論再怎么小心,細胞在冷凍和復蘇過程中總會死掉一批的。所以,一開始凍存細胞的數量要足夠。一般要達到5× 10^6 /毫升,一瓶不夠兩瓶湊。但是,這個不能一概而論。有些細胞,比如雜交瘤細胞,只需要1-3x 10^6 /毫升

細胞復蘇

  1.操作人員應戴防護面罩及手套,防止冷凍管可能爆裂之傷害。
   2.自液氮或干冰容器中取出冷凍管,檢查蓋子是否旋緊,由于熱脹冷縮過程,此時蓋子易松掉。
   3.將新鮮培養(yǎng)基置于37℃水槽中回溫,回溫后噴以70酒精并擦拭之,移入無菌操作臺內。
   4.取出冷凍管,立即放入3℃水槽中快速解凍,輕搖冷凍管使其在1分鐘內全部融化,以7O%酒精擦拭保存管外部,移入無菌操作臺內。
   5.取出解凍之細胞懸浮液,緩緩加入有培養(yǎng)基之培養(yǎng)容器內(稀釋比例為1:10~1:15),混合均勻,放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。取0.1m1解凍細胞懸浮液作存活測試。
   6.解凍后是否立即去除冷凍保護劑,依細胞種類而異,一般而言,大都不需要立即去除冷凍保護劑。
   惟若要立即去除,則將解凍之細胞懸浮液加入含有5-10m1培養(yǎng)基之離心管內,離心 1000rpm,5分鐘,移去上清液,加入新鮮培養(yǎng)基,混合均勻,放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

注意事項
  1.復蘇速度越快越好。從液氮罐里取出來之后,迅速放在37°C水浴中,搖晃令其盡快融化。

  2.解凍后的細胞要用和以前一樣的培養(yǎng)液和血清。因為每一種細胞都有自己特定的,并且已經熟悉了的生長環(huán)境。突然使用不一樣的培養(yǎng)液和血清,會造成細胞生長不良,甚至死亡。


關于產品
CryoStor®是Biolife公司特別優(yōu)化的細胞凍存液,在極低溫度 (-70ºC to -196ºC)下準備和保存細胞。預混DMSO,為細胞和組織的冷凍、儲存和解凍過程提供安全的保護環(huán)境。CryoStor®通過調控凍存過程的分子生物學反應,無血清、蛋白或具有高細胞毒性的試劑,就能增強細胞活力和功能。

貨號                產品描述                      規(guī)格
210210 CryoStor Cs10 Freeze Media細胞凍存液 1000mL/袋
210202 CryoStor Cs10 Freeze Media細胞凍存液 100mL/袋
210102 CryoStor Cs10 Freeze Media細胞凍存液 100mL/瓶
210374 CryoStor Cs10 Freeze Media細胞凍存液 16mL/瓶
210373 CryoStor Cs10 Freeze Media細胞凍存液  10mL/瓶
現貨供應中,欲購從速。

 

免费看国产曰批40分钟男男| 工口里番肉侵犯全彩无| 一本色道久久99精品综合 | 国产乱码久久久| 国产草草影院ccyycom| 欧美成人午夜精品久久久| 免费内射视频| 狂揉吃奶胸高潮视频免费| 色婷婷国产| 国产奶头好大揉着好爽视频| 老熟妇精品一区二区三区| 日韩一区二区中文字幕| 国产精品久久久久久久午夜| 亚洲黄色片在线观看| 97人人爽人人爽人人人| 综合激情五月天| 少妇人妻互换h系列全文| 久久久成人av毛片免费观看| 少妇久久久| 一区二区三区黄色| 国产乱人乱偷精品视频网站| 亚洲女人初尝黑人巨大进入| 大香蕉在线,一区二区| 91精品欧美久久久久久动漫| 亚洲精品国产精品乱码不卡√香蕉| 久久久久久久成人| 成人性生交大片免费看在线播放| 色欲人妻综合AAAAAAAA网| 日韩av成人在线| 成人一区二区三区视频| 91精品国产熟女| 亚洲av成人一区二区三区不卡| 国产精品福利网站| 精品人妻一二三区| 女女女女女bbbbbb毛片小说| 色哟哟在线| 少妇做爰免费视频播放| 亚洲成av人片在线观看| 乱码一区二区三区| 91午夜精品亚洲一区二区三区| av在线播放一区|