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一起來了解一下該如何正確的使用SFM無血清培養(yǎng)基

更新時間:2020-03-27瀏覽:3672次

  今天讓我們一起來了解一下該如何正確的使用SFM無血清培養(yǎng)基
 
  目前,血清仍是動物細胞培養(yǎng)中基本的的添加物,尤其是在原代培養(yǎng)或者細胞生長狀況不良時,常常會先使用有血清的培養(yǎng)液進行培養(yǎng),待細胞生長旺盛以后,再換成無血清培養(yǎng)液。
 
  細胞轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)要有一個適應(yīng)過程,一般要逐步降低血清濃度,從10%減少到5%,3%,1%,直至無血清培養(yǎng)。在降低過程中要注意觀察細胞形態(tài)是否發(fā)生變化,是否有部分細胞死亡,存活細胞是否還保持原有的功能和生物學(xué)特性等。
 
  在實驗后這些細胞一般不再繼續(xù)保留,很少有細胞能夠長期培養(yǎng)于無血清培養(yǎng)基而不發(fā)生改變的。細胞轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)之前,要留有種子細胞,種子細胞按常規(guī)培養(yǎng)于含血清的培養(yǎng)基中,以保證細胞的特性不發(fā)生變化。
 
  為了使細胞適應(yīng)無血清培養(yǎng),關(guān)鍵的是使所培養(yǎng)細胞:
 
  1.處于對數(shù)生長中期
 
  2.>90% 活細胞率
 
  3.適應(yīng)時以較高的起始細胞接種
 
  細胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)基的方法
 
  1.直接適應(yīng)--細胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基(SFM)中。
 
  一些類型細胞可直接從包含血清的培養(yǎng)基適應(yīng)無血清培養(yǎng)基。對于直接適應(yīng),接種細胞密度應(yīng)該:2.5×10~3.5×10細胞/ml。當(dāng)細胞密度達到1×10~3×10細胞/ml時,傳代培養(yǎng)細胞。當(dāng)細胞密度在培養(yǎng)4到7天后達到2×10~4×10細胞/ml時,細胞*適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基。每隔3~5天,當(dāng)細胞密度達到1×10~3×10細胞/ml,細胞活率在90%時,貯備的適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)物應(yīng)該再次傳代培養(yǎng)。
 
  2.連續(xù)適應(yīng)--分好幾步把細胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基(SFM)中,與直接適應(yīng)相比較,連續(xù)適應(yīng)趨向?qū)τ诩毎訙睾鸵恍?br /> 
  (1)以2倍正常接種密度接種生長活躍的細胞培養(yǎng)物到75%有血清培養(yǎng)基:25%SFM 混合培養(yǎng)基中,傳代培養(yǎng)。
 
  (2)當(dāng)細胞密度>5×10細胞/ml時,以2×10到3×10細胞/ml細胞密度,在有血清培養(yǎng)基:SFM為50∶50的混合培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。
 
  (3)以2×10到3×10細胞/ml細胞密度,25%有血清培養(yǎng)基和75% SFM中傳代培養(yǎng)。
 
  (4)當(dāng)細胞密度達到1×10到3×10細胞/ml(接種后4到6天),在100%SFM培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。
 
  (5)每隔3到5天,當(dāng)細胞密度達到1×10到3×10細胞/ml,細胞活率在90%時,貯備的適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)物應(yīng)該再次傳代培養(yǎng)。

 

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