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CAR-T細(xì)胞凍存袋分享細(xì)胞凍存方法

更新時(shí)間:2019-05-05瀏覽:4307次

   CAR-T細(xì)胞凍存袋分享CAR-T細(xì)胞凍存方法,包括以下步驟:

  (1)將培養(yǎng)的CAR-T細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心管中,在200-500g條件下,離心5-8min,棄掉上清液;

  (2)將離心后的細(xì)胞團(tuán)先用DPBS重懸,確認(rèn)細(xì)胞團(tuán)被*打碎,在磁力架上靜止2-5分鐘,實(shí)現(xiàn)細(xì)胞跟磁珠的分離;

  (3)用移液管將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至新的離心管中,重復(fù)去磁珠操作兩次;

  (4)將清除磁珠后的細(xì)胞懸液在200-500g條件下,離心5-8min,棄掉上清液,備用;

  (5)根據(jù)需要凍存的細(xì)胞總數(shù)量,計(jì)算凍存介質(zhì)的體積,將細(xì)胞重懸于凍存介質(zhì)中;

  (6)將細(xì)胞分裝于凍存管或者凍存袋中,放置于-80℃超低溫冰箱中緩慢冷凍8-18小時(shí),或者放置于程序降溫儀中按照相應(yīng)程序降溫至-85℃;降溫結(jié)束后,將細(xì)胞凍存管或者凍存袋轉(zhuǎn)移至液氮中長(zhǎng)期保存。

  回輸需要時(shí),在液氮條件下運(yùn)送至治療醫(yī)院,在37℃條件下快速解凍后,可以直接回輸給治療病人。

  所述步驟5中的凍存介質(zhì)由氯化鈉、二甲基亞砜、葡萄糖、人血白蛋白、低分子葡聚糖和RPMI-1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基組成,其中氯化鈉的質(zhì)量濃度為0.45-0.9%,二甲基亞砜溶液的體積濃度為5-15%,葡萄糖的質(zhì)量濃度為5-20%、人血白蛋白的質(zhì)量濃度為10-50%,低分子葡聚糖的質(zhì)量濃度為5-20%。

  優(yōu)選的,所述步驟5中的凍存介質(zhì),其中氯化鈉的質(zhì)量濃度為0.9%,二甲基亞砜溶液的體積濃度為10-15%,葡萄糖的質(zhì)量濃度為5-10%、人血白蛋白的質(zhì)量濃度為10-30%,低分子葡聚糖的質(zhì)量濃度為5-10%。

  進(jìn)一步優(yōu)選的,所述步驟5中的凍存介質(zhì),其中氯化鈉的質(zhì)量濃度為0.9%,二甲基亞砜溶液的體積濃度為10%,葡萄糖的質(zhì)量濃度為5%,人血白蛋白的質(zhì)量濃度為10%,低分子葡聚糖的質(zhì)量濃度為5%。

  所述步驟5中CAR-T細(xì)胞的凍存密度為1×106個(gè)/ml-500×106個(gè)/ml。

 

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