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人間充質(zhì)干細胞流式檢測方案

更新時間:2018-01-02瀏覽:7814次

人間充質(zhì)干細胞流式抗體鑒定流程

 

準備細胞

抗體染色

上機檢測

 

人間充質(zhì)干細胞流式鑒定操作步驟

 

1、準備細胞:取培養(yǎng)的細胞離心(300 g/5min),棄去上清, 加入一定量PBS洗滌一次,棄去上清,彈散細胞,細胞重懸到5×106~10×106之間

 

2、MSC人間充質(zhì)干細胞流式鑒定配色方案

取100 ml的細胞于EP管或流式管內(nèi),分三管染色。

*管 陽性配色 Anti-human CD90 FITC, Anti human CD105 APC,Anti-human CD45 PE-Cy7各加5 ml。

第二管 陰性配色 Anti-human HLA-RA FITC, Anti-human CD34 PE-Cy7, Anti-human CD73 APC各加5 ml。

第三管同型對照 Mouse IgG1 K Isotype Control FITC 0.6 mlMouse IgG1 Isotype Control PE-Cy7 1.2 ml,Mouse IgG1 Isotype Control APC 1.2 ml

 

配色依據(jù):細胞治療協(xié)會間充質(zhì)和組織干細胞委員會2006年提出了MSC鑒定的zui低標準,關(guān)于細胞表型的要求是表達CD90, CD105和CD73不表達CD45, CD34, CD14或CD11b, CD79a或CD19和HLA-DR;陽性指標都需要染色,陰性指標一般選擇2-3個指標,因為是做細胞表型鑒定,所以要配齊同型對照。

 

3、加入相應的抗體后混勻,建議彈管子,盡量不用槍頭直接吹打,室溫避光孵育15 min,染色過程中再混勻一次。

4、染色完成后加入1 ml的PBS洗滌細胞,離心300 g/5min。

5、棄去上清,彈散細胞,加入500 ml PBS重懸,上機檢測。

 

注意:1、同型對照是根據(jù)染色抗體的用量來計算的,所以每種同型對照可能加入量可能不一樣(具體可看后文同型對照章節(jié)的介紹)。

      2、先上機檢測同型對照管,各檢測通道以這一管的信號設為陰性,在上機檢測抗體染色管。

      3、zui后結(jié)果的顯示用峰圖來表示,每種抗體的檢測結(jié)果都與對應的同型對照染色結(jié)果疊加展示( overlay )。

 

MSC人間充質(zhì)干細胞流式鑒定結(jié)果

 

 

注意:CD90表達量非常高,所以建議用FITC熒光染料,F(xiàn)ITC/PE-Cy7/APC這三種熒光染料之間幾乎沒有補償,所以這三種染料一起染色不需調(diào)節(jié)補償,如果是做臍帶干細胞的鑒定,CD105抗體選擇SN6克隆號,其他克隆號染色結(jié)果不好(某些克隆號染不上)。

 

MSC人間充質(zhì)干細胞流式配色抗體產(chǎn)品

 

品牌

貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

價格

BioGems

03011-50

  Anti-Human CD90 (Thy-1) FITC

25 test/100 tests

25 test

1540元

BioGems

07111-77

  Anti-Human CD45 PE-Cy7

25 test/100 tests

25 test

1680元

BioGems

17111-80

  Anti-Human CD105 (Endoglin) APC

25 test/100 tests

25 test

2170元

BioGems

74111-50

  Anti-Human HLA-DR FITC

25 test/100 tests

25 test

1400元

BioGems

06411-77

  Anti-Human CD34 PE-Cy7

25 test/100 tests

25 test

2170元

BioGems

05811-80

  Anti-Human CD73 APC

25 test/100 tests

25 test

1960元

 

 

同型對照

總價

10920元

BioGems

44212-50

  Mouse IgG1 K Isotype Control  FITC

100 mg

1120元

BioGems

44212-77

  Mouse IgG1 Isotype Control  PE-Cy7

100 mg 

1890元

BioGems

44212-80

  Mouse IgG1 Isotype Control APC

100 mg

1750元

 

 

MSC人間充質(zhì)干細胞流式鑒定配色方案由Biogems提供。

 

上游產(chǎn)品 人間充質(zhì)干細胞無血清培養(yǎng)基

 

HY STEMCELL CCGmHuMTM 人間充質(zhì)干細胞無血清培養(yǎng)基成分確定、無血清、無異源物,無需鋪板膠的*培養(yǎng)基。適用臍帶或脂肪來源的人間充質(zhì)干細胞的原代培養(yǎng)擴增。培養(yǎng)的hMSC可傳多代。

 

 

背景知識

 

間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells,MSCs)來源于中胚層,是一種類似成纖維細胞樣形態(tài),貼壁生長,表達CD105、CD73、CD90,不表達CD45、CD34、CD14或CD11b、CD79a或CD19的細胞;它可以從骨髓、脂肪、臍帶華通氏膠、胎盤臍帶血、牙髓絨毛膜等多種組織中被分離出來;它是具有高度自我更新能力和多向分化潛能的多能干細胞,能體外培養(yǎng)并在特定條件下分化為神經(jīng)細胞、成骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞等。MSCs在細胞治療中有廣泛的用途,包括組織工程、再生醫(yī)學和被用作基因治療的載體。

 

 

 

MSC人間充質(zhì)干細胞流式產(chǎn)品代理,華雅人間充質(zhì)干細胞無血清培養(yǎng)基銷售歡迎您致電 華雅再生醫(yī)學旗艦公司:紅榮微再(上海)生物工程技術(shù)有限公司 

 

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