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間充質(zhì)干細胞無血清培養(yǎng)基細胞培養(yǎng)方法

更新時間:2017-09-04瀏覽:2653次

   ★ 間充質(zhì)干細胞無血清培養(yǎng)基細胞培養(yǎng)

  【復(fù)蘇】

  1.將配置好的*培養(yǎng)基放入37℃水浴中預(yù)熱5-15 min;

  2.從液氮中取出干細胞迅速放入37℃水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)孵育細胞);

  3.在超凈臺中加入5 ml的 *培養(yǎng)基重懸細胞,1000 rpm離心5 min;

  4.棄上清,加入 5 ml的*培養(yǎng)基重懸細胞,轉(zhuǎn)移到T-25培養(yǎng)瓶中(帶濾芯);

  5.將培養(yǎng)瓶置于37℃,5%CO2 的無菌恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

  6.第二天用新鮮的 *培養(yǎng)基給細胞換液。

  間充質(zhì)干細胞無血清培養(yǎng)基【 培養(yǎng)】

  1.在顯微鏡下觀察細胞,當(dāng)細胞融合度達到80%時,即可傳代;

  2.37℃水浴預(yù)熱*培養(yǎng)基;

  3.在超凈臺中,棄掉T-25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,加入2 ml PBS清洗,再加入1 ml 0.25%胰酶-EDTA消化細胞;

  4.在顯微鏡下觀察到細胞變圓,有細胞開始脫離瓶壁時,即可加入5 ml *培養(yǎng)基終止消化;

  5.用移液器輕輕吹打瓶壁上剩余的細胞,并輕輕吹打?qū)⒓毎瞪?

  6.將細胞轉(zhuǎn)移到15 ml離心管中,1000 rpm離心5 min;

  7.棄上清,加入15-20 ml的 *培養(yǎng)基重懸細胞后轉(zhuǎn)入T-75細胞培養(yǎng)瓶中或按適當(dāng)比例傳到T-25細胞培養(yǎng)瓶中。確保后融合度在25-50%之間,細胞密度在1×104cells/cm2 (2.5×105 cells/T-25瓶),混合細胞懸液,確保細胞均勻分布;

  8.將細胞培養(yǎng)瓶置于37℃,5%CO2 的無菌恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

  9.每兩天用新鮮、預(yù)熱的*培養(yǎng)基進行換液。

  間充質(zhì)干細胞無血清培養(yǎng)基【凍存】

  1.細胞消化和計數(shù),用胰酶對待凍存的細胞進行消化,并對細胞進行計數(shù)。

  2.1000 rpm離心5 min,去掉上清。

  3.根據(jù)細胞計數(shù)的情況,加入適量的凍存液,使細胞密度在1×106/ml左右(或根據(jù)自己希望達到的細胞密度)。

  4.輕輕地重懸細胞(務(wù)必重懸均勻),將重懸的細胞按等份加入到滅菌的凍存管(需提前做好標(biāo)記或者貼上標(biāo)簽)中,旋緊凍存管蓋。

  5.將凍存管放入程序降溫凍存盒中,然后將凍存盒直接放入-80℃。

  6.第二天將細胞從-80℃轉(zhuǎn)移到液氮中。

 

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