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支原體檢測(cè)試劑盒的作用及實(shí)驗(yàn)過(guò)程

更新時(shí)間:2016-09-16瀏覽:2993次

   支原體檢測(cè)試劑盒是用于在培養(yǎng)細(xì)胞中原位染色檢測(cè)支原體或其它原核生物的試劑盒。主要用于檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞中是否存在支原體污染。

  培養(yǎng)細(xì)胞中的細(xì)菌污染、酵母污染或霉菌污染都在光學(xué)顯微鏡下可見,但支原體污染在光學(xué)顯微鏡下不可見,必須通過(guò)特定的檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)支原體污染的方法有很多種,包括支原體分離培養(yǎng)、支原體特異酶檢測(cè)、RT-PCR檢測(cè)以及DNA熒光染色檢測(cè)。上述檢測(cè)方法中,除DNA熒光染色檢測(cè)外操作步驟相對(duì)比較煩瑣并且所需時(shí)間較長(zhǎng)。本支原體檢測(cè)試劑盒是通過(guò)Hoechst染色來(lái)檢測(cè)支原體的。支原體檢測(cè)試劑盒的熒光染色可快速、有效、高靈敏度地檢測(cè)支原體污染。

  細(xì)胞培養(yǎng)體系被支原體污染之后,支原體*的代謝酶類會(huì)產(chǎn)生支原體*的代謝產(chǎn)物,而真核細(xì)胞或細(xì)菌不會(huì)產(chǎn)生這種代謝產(chǎn)物,因而可以通過(guò)檢測(cè)這種代謝產(chǎn)物而檢測(cè)支原體的存在。如果樣品中含有支原體特異的代謝產(chǎn)物,反應(yīng)系統(tǒng)(包括樣品、反應(yīng)孔與反應(yīng)緩沖液)會(huì)產(chǎn)生藍(lán)綠色,代謝產(chǎn)物濃度越高,顏色越深。

  支原體檢測(cè)試劑盒儲(chǔ)存條件

  該試劑盒已滅菌封裝。4-25℃儲(chǔ)存,可達(dá)12個(gè)月。

  支原體檢測(cè)試劑盒的實(shí)驗(yàn)方法

  1. 所有操作均在室溫(22-28℃)下進(jìn)行。

  2. 打開檢測(cè)板,在孔中加入40 μL Reaction Buffe A。

  3. *個(gè)孔加入10 μL陰性對(duì)照,其他孔加入10 μL待測(cè)樣品或陽(yáng)性對(duì)照。

  4. 輕輕混勻,室溫孵育5分鐘。

  5. 所有孔中均加入40 μL Reaction Buffe B。

  6. 輕輕混勻,室溫孵育4分鐘。

  7. 每孔加入5μL Stop Solution,輕輕混勻。

  8. 可在30分鐘內(nèi)觀察樣品顏色的變化或進(jìn)行拍照保存:

  a) 如果待測(cè)樣品的顏色深于陰性對(duì)照,表明樣品被支原體污染。

  b) 如果待測(cè)樣品的顏色與陰性對(duì)照相同,表明樣品沒有支原體污染。

  如果發(fā)現(xiàn)有支原體污染,建議更換無(wú)污染的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。如果有必要去除支原體,可以使用Mycoplasma Removal Agent、cyprofloxacin或BM-Cyclin去除支原體污染。支原體檢測(cè)試劑盒如用于六孔板樣品檢測(cè),至少可以檢測(cè)100個(gè)樣品。

 

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